Desenvolvimento de metodologia inovadora para determinação de 6

Scientific Reports volume 13, Artigo número: 14172 (2023) Citar este artigo

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A 6-tioguanina é um medicamento imunossupressor, análogo da guanina, aplicado no tratamento de leucemia aguda e doença inflamatória intestinal. O uso excessivo de 6-tioguanina durante o tratamento clínico pode causar efeitos colaterais. Além disso, fornecer uma dose demasiado baixa será ineficaz. Portanto, existe uma necessidade crítica de uma abordagem rápida, seletiva e rotineira para quantificar a 6-tioguanina em fluidos corporais para apoiar uma aplicação clínica. Um método de HPLC totalmente validado foi desenvolvido para determinar 6-tioguanina em amostras de sangue total usando 5-bromouracil como padrão interno. Os nucleótidos de 6-tioguanina foram libertados dos eritrócitos por ácido perclórico e depois hidrolisados ​​a 100 ° C na tiopurina original, 6-tioguanina. Foram determinados os seguintes parâmetros de validação do método: especificidade/seletividade, faixa de linearidade (479–17.118 ng/mL, R > 0,992), limites de detecção (150 ng/mL) e quantificação (479 ng/mL), precisão (- 5,6 < Bias < 14,7), repetibilidade (CV 1,30–3,24%), precisão intermediária (CV 4,19–5,78%), recuperação de extração (79,1–103,6%) e carryover. Além disso, foi investigada a estabilidade do medicamento em amostras de sangue total sob diversas condições de armazenamento. O método sugerido é adequado para determinar 6-tioguanina em amostras de eritrócitos de sangue total para monitoramento do nível de medicamento, corrigindo assim a dosagem.

6-Tioguanina (6-TG) é um análogo purina da guanina; mais precisamente, é um derivado de enxofre da guanina1. O 6-TG pertencia a uma família das tiopurinas e foi introduzido em 1950 como tratamento para a leucemia. Cinquenta anos depois, os médicos começaram a usá-lo para tratar doenças inflamatórias intestinais, aqueles que não receberam azatioprina (AZA) ou mercaptopurina (MP) devido a eventos adversos limitantes da dosagem ou resposta subótima2, 3. No entanto, preocupações sobre o perfil de hepatotoxicidade têm sido dificultada pelo uso generalizado, especificamente a hiperplasia regenerativa nodular (NRH)4. O 6-TG também é utilizado no tratamento clínico da síndrome da imunodeficiência adquirida, doenças autoimunes como psoríase e quimioterapia para leucemias agudas, particularmente leucemia mieloide aguda e leucemia linfoblástica aguda5, 6. O risco adicional associado ao 6-TG pode ser o desenvolvimento de linfoma e câncer de pele, como demonstrado no caso das terapias AZA/MP e anti-TNF7, 8. Portanto, é importante verificar regularmente o nível de 6-TG para confirmar a dose correta do medicamento ou, em caso de alteração resultados, para ajustar a dose. As tiopurinas, incluindo o 6-TG, têm efeito imunossupressor ao incorporar seus metabólitos farmacologicamente ativos, nucleotídeos de 6-tioguanina (6-TGN), em ácidos nucléicos9. Consequentemente, isso leva à inibição da proliferação de linfócitos, incluindo o seu papel significativo na indução da apoptose10. Embora os mecanismos que causam a resistência das células leucêmicas à 6-tioguanina sejam atualmente mal compreendidos, tem sido sugerido que a redução ou ausência da atividade da hipoxantina-guanina fosforibosil transferase (HGPT), juntamente com a atividade alterada da tiopurina S-metiltransferase (TPMT), estimulam a sensibilidade e a resistência a esta compostos12. Além disso, foi demonstrado que defeitos no sistema de reparo de incompatibilidades de DNA estimulam a resistência adquirida a numerosos compostos farmacêuticos anticancerígenos, incluindo a 6-tioguanina. A medição dos níveis do metabólito eritrocitário 6-TG ajuda a determinar a adequação da dosagem de AZA e pode ser usada para otimizar a dose da terapia antimetabólito para obter uma resposta clínica melhorada sem induzir leucopenia14. A combinação de infliximabe e tiopurinas (como 6-tioguanina) em pacientes com doenças inflamatórias intestinais é mais eficaz do que a monoterapia. A medição da atividade do TPMT é incentivada antes de iniciar o tratamento de pacientes com medicamentos tiopurínicos, como a 6-tioguanina, permitindo o ajuste da dose de tiopurina ou evitando completamente o medicamento15. Em muitas etnias, os polimorfismos do TPMT resultam em diminuição (prevalência de 10%) ou ausência (0,3%) da atividade do TPMT16. Indivíduos homozigotos ou heterozigotos para esses tipos de variação genética podem apresentar níveis aumentados de metabólitos de TGN, aumentando o risco de toxicidade da medula óssea induzida por medicamentos devido ao acúmulo do medicamento não metabolizado17. Níveis de 6-TGN superiores a 230 pmol/8 × 108 hemácias foram associados a melhores resultados em pacientes em monoterapia. Um nível de 6-tioguanina de 125 pmol/8 × 108 hemácias ou superior pode ser adequado para atingir níveis terapêuticos de infliximabe18. Geralmente, níveis de 6-TGN superiores a 235 pmol/8 × 108 hemácias são recomendados como nível de corte terapêutico para pacientes em uso de AZA ou 6-MP19. Um nível seguro e terapêutico está entre 500 e 800 pmol/8 × 108 hemácias20. Para a terapia com 6-TG em pacientes com DII, ainda não foram descritos níveis terapêuticos ou tóxicos precisos de 6-TGN. No entanto, a hepatotoxicidade, particularmente a hiperplasia regenerativa nodular (NRH) e a doença venooclusiva (DVO), é dose-dependente e está relacionada a níveis de 6-TGN superiores a 1000 pmol/8 × 108 hemácias21. O uso excessivo de 6-TG durante o tratamento clínico pode ter efeitos colaterais extratóxicos6. Além disso, a subdosagem será ineficaz. Portanto, uma abordagem rápida e totalmente validada para determinar quantitativamente o 6-TG em fluidos corporais é fundamental para auxiliar no uso clínico. Atualmente, os imunoensaios e a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) são técnicas difundidas, práticas e sensíveis no monitoramento terapêutico de medicamentos22, 23.